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聚丙烯酰胺凝胶的变性与非变性

点击次数:   更新时间:20/10/12 17:16:10     来源:www.huahiji.com关闭分    享:
聚丙烯酰胺
  聚丙烯酰胺凝胶是一种合成凝胶,由亚甲基双丙烯酰胺以丙烯酰胺为单位交联,干燥、粉碎或加工成颗粒,通过控制交联剂的用量可以制成各种类型的凝胶。交联剂越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商业产品是Bio-Gelp,是日本tosoh的TSKGEL的pw系列,适用于蛋白质和多糖的纯化。即丙烯酰胺和少量交联剂亚甲基双丙烯酰胺在催化剂TEMED和氧化剂过硫酸铵作用下聚合形成凝胶。今天我们来看看PAM凝胶的两种电泳形态。
  变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是基于寡核苷酸的大小,所以全长产物可以从不完整的短分子中分离出来。通常,在电泳过程中,每个泳道中加入至少1毫克的合成寡核苷酸。电泳后,寡核苷酸带位于紫外灯下,从凝胶上切下正确长度的寡核苷酸。原理:蛋白质或多肽与SDS结合,经过热变性和二硫键还原,形成负电荷相对一致的未折叠衍生物,其迁移速度主要由分子量决定。
  非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE),或活性电泳,用于对活性蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,无需添加变性剂如SDS、乙醇等,常用于酶的鉴定、同工酶分析和纯化。无SDS的天然pam凝胶电泳可以在电泳过程中保持生物大分子的天然形状和电荷。它们的分离是基于电泳迁移率和凝胶分子筛作用的差异,因此可以获得更高的分辨率,特别是电泳分离后,蛋白质、酶等生物大分子的生物活性仍然可以保持,这对生物大分子的鉴定具有重要意义。该方法是将两个相同的样品在凝胶上电泳,电泳后将凝胶切成两半,一半用于活性染色以鉴定特定的生物大分子,另一半用于染色所有样品以分析样品中各种生物大分子的类型和含量。
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